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非洲豬瘟病毒 熒光PCR快速檢測試劑盒

【主要成分與含量】 序號 成分 含量 1 PCR反應液 1管(1ml/管) 2 裂解稀釋液 4管(2.5ml/管) 3 陰性對照 1管(0.5ml/管) 4 陽性對照 1管(0.5ml/管) 5 說明書 1份 【作用與用途】本試劑盒適用于豬血液、豬肉組織、淋巴結、脾臟等樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。 【用法與判定】 1 用法 1.1 樣品處理及模板準備 1.1.1 樣品處理 ?組織樣品處理:分別從豬肉組織、淋巴結、脾臟不同位置取樣,用手術剪剪碎混勻后取0.1g于研磨器中研磨,加入1.5ml生理鹽水繼續研磨,待勻漿后轉至1.5ml無菌離心管,12000 r/min離心2分鐘,取上清200μl備用。 ?血液樣品無需處理,取200μl備用。 1.1.2 模板準備 ?根據待檢樣品數量,準備無菌1.5ml離心管,并做好標記。 ?每管加入190μl裂解稀釋液。 ?每管分別加入已處理的待檢樣品10μl,充分混勻,室溫放置2分鐘。 ?12000 r/min離心1分鐘,上清即為模板DNA。 1.1.3可利用商品化試劑盒提取核酸進行反應,效果更佳 1.2 熒光PCR擴增 1.2.1 試劑準備 實驗前20分鐘將試劑從冰箱取出并恢復至室溫,使其完全融化,充分混勻后瞬時離心去除管壁吸附液體。 1.2.2 配制反應體系 按下表1體系,在配套PCR管中配制反應體系,蓋緊管蓋后瞬時離心10秒,轉移至擴增區。 表1 PCR反應體系 成分 體積 PCR反應液 20μl 預準備的模板(樣本/對照) 5μl 總體積 25μl 1.2.3 PCR擴增 開機預熱并檢驗儀器性能后,取配制好體系的PCR反應管,放置在樣品槽相應位置,記錄順序,按下表2設置擴增參數,進行PCR擴增。 表2 儀器PCR擴增參數 階段 溫度 時間 循環數 1 95℃ 3 min 1 2 95℃ 15 s 45 60℃ 30 s(采集熒光信號) FAM通道采集熒光信號 2 判定 2.1 合理調整閾值線,不同儀器可根據儀器噪音情況進行調整。 2.2 試劑盒有效性判定 ?陰性對照:無Ct值,線形為直線或微斜,無明顯指數增長。 ?陽性對照:Ct值≤30,有明顯指數增長,呈典型的S型曲線。 2.3 樣本結果判定 ?樣本檢測結果Ct值≤40,有明顯指數增長,判定為陽性,表明樣本中檢測出非洲豬瘟病毒。 ?樣本檢測結果40<Ct≤45,判定為可疑。應對樣本進行復測,若復測結果Ct值仍在40~45之間,有明顯指數增長,則判定為陽性,否則為陰性。 ?樣本檢測結果無Ct值,判定為陰性,表明樣本中未檢測出非洲豬瘟病毒。 【注意事項】 (1)實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書,嚴格按步驟執行,不使用本試劑盒提供的組份或不按照說明書進行實驗可能導致錯誤結果。 (2)所有試劑應在規定溫度儲存。-20℃保存的試劑在使用前應充分混勻。試劑盒反復凍融次數不宜超過5次。 (3)實驗操作應按照國家有關臨床基因擴增實驗室管理規范執行,實驗過程應分區(試劑準備區、樣本制備區、核酸擴增區),各區物品為專用,不得交叉使用,避免污染。 (4)操作臺、移液器、離心機等儀器用品應經常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應進行無酶處理。 (5)待檢樣本、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質處理方法進行處理。 (6)為防止熒光干擾,應避免使用含熒光物質的手套,避免用手直接接觸,預防交叉污染。 (7)檢測結果為陰性,并不完全代表為非感染狀態,具體診斷需結合獸醫臨床。 (8)產生假陰性的可能原因為:待檢樣本在采集、運輸、保存及核酸提取過程中操作不當造成DNA降解;樣本中核酸濃度低于最低檢測限;病毒待測靶基因出現變異;未經驗證的其他干擾因素。 (9)產生假陽性的可能原因為:待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發生交叉污染。 【規格】 50反應/盒 【貯藏及有效期】 試劑盒-20℃以下冷凍避光保存,有效期為12個月。 【批準文號】 【研發單位】北京市動物疫病預防控制中心 北京蘭伯瑞生物技術有限責任公司 【生產企業】 廣州悅洋生物技術有限公司 僅供獸醫診斷使用
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